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大肠杆菌O157:H7核酸快速检测试剂盒

英文名称:Rapid Detection kit for E. coli O157: H7

货 号 :KJD09L

规 格 :24测试/盒

用途:大肠杆菌O157:H7核酸快速检测试剂盒

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添加日期:2016-12-13

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【产品名称】

通用名称:大肠杆菌O157:H7核酸快速检测试剂盒

英文名称:Rapid Detection kit for E. coli O157: H7

【包装规格】24测试/盒

【产品编号】KJD09L

【产品简介】

本试剂盒基于环介导的恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),用于食品中大肠杆菌O157:H7的快速检测,可借助显色指示剂直?#20248;?#35835;结果。

【检测原理】

利用两对特殊引物?#36884;?#26377;链置换活性的Bst DNA聚合酶,使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构,引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应,实现在恒温条件下(60-65℃)进行连续快速扩增。反应加入显色指示剂,阴阳性结果显色差异显著,可直接通过颜色变化判读结果。

【产品特点】

1. 快速简便:将?#28014;?#24341;物?#30830;?#24212;组分混匀后进行干粉化处理,增加试剂稳定性,使用时减少溶?#21495;?#21046;步骤,更为便捷,整个检测反应可在1 h内完成;

2. 特异性高:利用靶基因序列上的多个独立区域设计多条引物,保证扩增反应的高度特异性;

3. 灵敏度高:最低检验限达到29 CFU/Test;

4. 判读简单:反应前加入显色指示剂,反应后通过肉眼观察反应液颜色变化或者经荧光监测仪器跟踪荧光?#35745;?#30340;变化判读结果,直观方便,且可?#34892;?#36991;免反应后开盖造成的气溶胶污染。

【产品组分】

组分名称                       规格×数量

检测试剂(冻干)            3排× 8管

复溶液                        650 μL × 1管、

阳性对照(冻干)              1 管

阴性对照(冻干)              1 管

裂解液                          1 mL × 1管

显色指示剂                   80 μL×1管

超纯水                           1 mL×1管                        

说明书                               1份   

2~8℃条件下储存,?#34892;?#26399;为12个月、

【适用仪器】

1. PCR仪器或金属浴恒温器,如果检测样品为DNA样品,水浴锅即可。

2. 高速离心机,样品的?#25353;?#29702;需要用高速离心机做分离。

【样品富集】

1. 样品?#25353;?#29702;:取25g待检样品置于225 mL mEC肉汤中,前增菌10-12 h,对增菌液中的菌体富集用于LAMP快速检测。

2. 适用样品类型:增菌液或者可?#21024;?#33853;样品。

3. 待测样品存放:粗提的待检DNA样品保存于-4~0℃,不应该超过24 h;利用试剂盒提取的DNA样品可在-20℃长期保存,但应避免反复冻融。

【使用指南】

1. 样品?#25353;?#29702;

A. 样品增菌液模板DNA的制备:

a) 在检测食品中大肠杆菌O157:H7?#20445;?#21560;增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中,6000 r/min离心5 min,弃上清;

b) 加入30 μL裂解液,充?#20013;?#28014;菌体,轻弹管壁消除气泡,99℃加热10 min。

c) 12000 r/min离心15 min,上清?#27425;?#31895;提的DNA,可转移至0.2 mL无菌离心管中,在-20℃下可长期保存。

B. 可?#21024;?#33853;模板DNA的制备:

挑取可?#21024;?#33853;,悬浮?#33014;?0 μL裂解液的无菌离心管中,后按照上述步骤b)、c)操作。

2. 阴、阳性对照和干粉试剂复溶

A. 阴、阳性对照复溶

首次使用?#20445;?#21152;入80 μL超纯水至阳性对照和阴性对照冻干粉中,待溶解后混匀,-20℃存储待用。

B. 干粉试剂复溶

取出冻干粉试剂,按照需求剪取n个检测试剂管(n=待检测样品数+1管阳性对照+1管阴性对照),?#25239;?#21152;入20 μL复溶液,完全溶解后待用。

1. 扩增反应

A. 打开能够提供恒温条件的仪器,设置到64℃待用;

B. 向上述已加入复溶液的n个反应管中各加入显色指示剂2.5 μL;

C. 向上述已加入复溶液的n个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各2.5 μL,盖紧盖子;

D. 将所有的反应管置于恒温仪器中,反应50 min。

2. 结果判读

反应结束后,建议在?#21248;?#20809;线充足的环?#31243;?#20214;下,将样品置于白色背景下观察结果,阴性对照检测试剂管?#23454;?#27225;色,阳性对照检测试剂管呈荧光绿,待测样品反应管以此作为对照进行判?#31890;?#33509;阴阳对照反应管?#25105;?#32467;果与上述情况不符,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。

【注意事项】

1. 检测空间应?#32454;?#20998;区操作,在空间条件允许情况下,试剂配?#20204;?#29992;于配置反应所需要的所有试剂;样品?#25353;?#29702;区用于待测样品的核酸提取和模板的加入;扩增观察区用于反应进行和结果判读。各区内空间独立,试验用品专用,避免交叉污染。另外,样品处理区建议配备超净工作台,并且所有步骤?#32454;?#25353;照说明书的要求进行。

2. 检测过程中建议穿洁净工作服,带一次性手套,使用的枪头需提前灭菌。

3. 干粉检测试剂在使用前低速离心,确保所有的干粉沉在管底,加入复溶液后尽量避免产生气泡,反应前检查反应管是否盖紧,避免泄?#23545;?#25104;污染。

4. 阳性对照可能会作为污染源,污染其他试剂和待检样品,导致出现假阳性结果,在加样过程中建议最后加入阳性对照反应管。

5. 使用显色指示剂?#20445;?#22312;反应结束后切忌开盖,以防气溶胶污染。

6. 本试剂盒仅用于食品和环境中样品的检测。

本试剂盒是基于核酸的分子检测,因此并 非只能检出大肠杆菌O157:H7活菌,判定结果有时会与传统培养法不同,如需辨明活菌样品存在,请用传统微生物检验方法进行确证。

7. 试剂盒中反应管材质为聚丙烯,包装盒材质是纸,使用完毕废弃时按照医?#21697;?#24323;物相关规定处理,?#22674;?#29992;者自行负责处理。

8. 不同批号的产品请勿混合使用,请在?#34892;?#26399;内使用试剂盒,由于操作不当引起的误判,以及有此误判引发的其他事项,本公司概不负责。

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